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SMOBIO蛋白marker FA Q

Q，如何選擇適合的產品？

SMOBIO 蛋白marker 分子量范圍廣、條帶清晰銳利

PM2510符合大多數使用者需求

小分子選PM2700

大分子選PM2800

Q，為何大分子條帶會消失不見

跑膠緩沖液遭受蛋白酶(proteinase) 污染，或是buffer reuse 太多次，導致長菌以致于有proteinase 存在，或是上樣時反復使用同一支 tip。

                                           受到污染后蛋白會從大分子開始降解

解決辦法:

1.  上樣時使用避免反復使用同一支Tip。

2.  內槽使用新鮮配置的跑膠緩沖液。

Q，為何轉膜后條帶會歪斜或消失不見？

膠體與膜之間未緊貼，膠體與膜之間仍有緩沖液

模擬試驗: 轉膜裝置未緊貼

解決辦法:

1.   增加filter paper 張數(或厚度)à上下各三張

2.   使用滾輪膠體與膜之間氣泡或緩沖液趕走

3.   更換新的海綿墊

Q,為何轉膜后高分子條帶消失？

1. >100KDa高分子量蛋白會需要比較長的轉膜時間及較高的電壓

2. 緩沖液重復使用太多次或組成不正確，建議使用新鮮配制的緩沖液

3. 轉膜液體可添加0.01?0.1％SDS以促進高分子量蛋白質的轉移

在正確轉膜條件下，10-310kDa在轉膜后都是清晰可見的狀態

Q,為何小分子條帶 (<5kDa) 會跑不出來？

條帶在不同緩沖溶液系統、不同濃度會有不一樣的分布 (如下圖)，

須根據需求來選擇膠的濃度或挑選適合的緩沖溶液系統

? 若<10kDa分子分不開，建議使用MES buffer

? 若>100kDa分子分不開，建議使用MOPS buffer

Q,為何洗膜后條帶會變弱或不見

1. 洗膜液體中的Tween20濃度過高 (建議使用0.05%~1%)

2. 洗膜轉速過高(建議使用25~50 rpm)